换一批重组免疫毒素GnRH-PTD-PE39KDEL的构建及表达
Construction and expression of a recombinant immunotoxin GnRH-PTD-PE39KDEL
摘要通过引入蛋白质转导域(PTD),提高免疫毒素人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A衍生物(GnRH-PE39KDEL)对肿瘤细胞的杀伤活性.设计了3条引物,通过2轮PCR在GnRH-PE39KDEL基因的人促黄体激素释放激素C端和绿脓杆菌外毒素A衍生物N端引入PTD,获得GnRH-PTD-PE39KDEL基因经酶切后插入pET-His载体,并转化至BL21(DE3)中.采用镍离子螯合层析法纯化诱导表达样品,并进行了生物活性测定.成功构建了免疫毒素表达载体pET-His-GnRH-PTD-PE39KDEL;诱导产物可以实现可溶性表达；表达产物占菌体总蛋白的20％,靶向融合蛋白引入PTD后对人乳腺癌MCF-7细胞的IC50为0.860μg/mL,表明较GnRH-PE39KDEL生物活性增强.成功地表达了融合蛋白GnRH-PTD-PE39KDEL,为其进一步大规模表达、纯化和功能研究奠定了基础.
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DOI
10.3976/j.issn.1002-4026.2013.03.002
发布时间
2013-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
重大新药创制"科技重大专项（2009ZX09102-214）
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