换一批
换一批利用Red重组系统敲除大肠杆菌rnc基因构建dsRNA原核表达体系
KNOCK-OUT THE RNC GENE OF E COLI USING RED-MEDIATED RECOMBINATION FOR CONSTRUCTION OF DSRNA PROKARYOTIC EXPRESSION SYSTEM
摘要大肠杆菌的rnc基因编码产物为RNaseIII酶,RNaseIII酶能降解细菌中绝大多数dsRNA.利用来源于λ噬菌体的Red重组系统和重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR),敲除了大肠杆菌origami(DE3)菌株的rnc基因,获得了RNaseIII 缺失型菌株M-origami.利用电激法,将构建的TMV运动蛋白基因(movement protein gene,MP)的dsRNA表达载体LMP480导入M-origami菌株中,IPTG诱导表达的结果显示:构建的M-origami/LMP480原核表达系统能高效表达TMV运动蛋白基因的dsRNA.初步的抗病性鉴定显示,表达的dsRNA能够诱发烟草对TMV的抗性.
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