换一批海栖热袍菌磷酸戊糖变位酶基因克隆表达及发酵条件优化
Cloning, Expression and Fermentation Optimization of Thermotoga Maritima Phosphpentomutase Gene in E. coli
摘要目的 从嗜热微生物海栖热袍菌中克隆磷酸戊糖变位酶基因,实现其在大肠杆菌中的表达.方法 以海栖热袍菌基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得编码磷酸戊糖变位酶蛋白基因(ppm),连接到具有T7强启动子的pET-32a质粒中,构建重组工程菌E.coli BL 21(DE3){pET-32a-Tmppm}.通过Plackett-Burman设计、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验方法优化工程菌发酵条件,构建回归方程.结果 双酶切鉴定、测序分析和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实海栖热袍菌磷酸戊糖变位酶基因可在工程菌中表达.最佳发酵条件为诱导种龄0.6,诱导温度22.5℃,诱导时间13 h,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.45 mmol/L,培养基初始pH 7.6,接种量2.25％.结论 发酵条件优化后磷酸戊糖变位酶表达量大幅提高.实验结果为该酶的性质研究和应用提供了支撑.
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关键词
海栖热袍菌磷酸戊糖变位酶重组大肠杆菌发酵优化Thermotoga maritimaphosphopentomutaseresponse surface methodologyfermentation optimization
医学主题词
分子内转移酶类(Intramolecular Transferases)海栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)发酵(Fermentation)基因(Genes)大肠杆菌(Escherichia coli)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-979X.2017.04.001
发布时间
2017-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
重大新药创制"科技重大专项（2014ZX09J14103-09C-003）
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