换一批腺相关病毒主要调控蛋白Rep78的表达及其与HBV-X基因启动子的体外结合
Expression of the Adeno-associated Virus Rep78 as a Major Regulatory Protein and Its Binding with Hepatitis B Virus X Gene Promoter in Vitro
摘要目的 对腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)Rep78蛋白对乙肝病毒X启动子(HBV-X promoter)的可能作用进行初步研究.方法 利用pMAL-Rep78(含有Rep78全长基因的表达质粒)在大肠杆菌中表达并纯化得到带有AAVRep78蛋白的MBP-rep78融合蛋白;通过SDS-电泳及免疫印迹(Western blot)鉴定蛋白表达.合成地高辛标记的X启动子3段探针;以非放射性凝胶电泳阻滞实验(EMSA)检测Rep78与HBV-X启动子的结合.结果得到纯化的MBP-rep78融合蛋白;EMSA结果显示Rep78蛋白在体外能够与HBV-X启动子DNA结合,并有剂量依赖关系.结论 AAVRep78可以与HBV-X启动子结合.
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