换一批摘要目的 研究TRIM5α抗HIV-1功能.方法 从vero细胞中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术获得非洲绿猴TRIM5α全基因序列.用PCR技术从人、恒河猴和非洲绿猴TRIM5α全基因序列中扩增B30.2和coiled coil等功能片段.将测序鉴定过的目的基因克隆到真核表达载体pEGFP-C3上,与绿色荧光蛋白融合表达,荧光显微镜观察目标蛋白在细胞内的定位.利用VSV-G膜蛋白质粒和HIV-1骨架质粒包装假病毒,通过假病毒感染实验定量检测TRIM5α及其功能片段对HIV-1的抑制功能.结果 成功地构建了带有绿色荧光蛋白标签的TRIM5α及其功能片段真核表达质粒.人、恒河猴和非洲绿猴TRIM5α及其功能片段蛋白均定位于细胞质,其中hTRIM5α、rhTRIM5α、AGMTRIM5α、rh-TRIM5αCC/B30.2、AGM-TRIM5αCC/B30.2融合蛋白以高聚状态存在于胞质内,而h-TRIM5αCC/B30.2和不同种属TRIM5αB30.2融合蛋白则均匀分布于胞质内.恒河猴和非洲绿猴TRIM5α及CC/B30.2对HIV-1假病毒的抑制率均达70%,而人TRIM5α及各种属B30.2对假病毒的抑制率低于20%.结论 恒河猴和非洲绿猴TRIM5α CC/B30.2功能结构域对HIV-1有拮抗作用,为TRIM5α最小功能结构域的确定及结构的解析提供了可靠的实验依据.
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分类号
R512.91（传染病）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1006-7795.2011.03.006
发布时间
2011-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家传染病防治科技重大专项（2008ZX10001-006,2008ZX10001-001）
北京市科委项目（D0906003040391）
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