异柠檬酸脱氢酶1基因突变焦磷酸测序检测方法的建立

Establishment of pyrosequencing method to detect isocitrate dehydrogenase 1 mutations

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摘要目的建立异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)基因突变的焦磷酸测序检测方法,确定该方法的检测灵敏度。分析焦磷酸测序法与直接测序法对于鉴定IDH1突变的差异。方法构建携带野生型和突变型IDH1基因的质粒,使用质粒优化焦磷酸测序方法。使用已知比例的野生型和突变型质粒作为模版,确定突变的检测灵敏度。针对96例胶质瘤患者手术切除标本的基因组DNA,分别使用直接测序法和焦磷酸测序法,鉴定IDH1基因突变类型,并比较。结果使用焦磷酸测序能够检测到低至2%的IDH1突变。直接测序检出突变阳性率为32.3%、焦磷酸测序检出突变阳性率为74.0%。结论焦磷酸测序法检测IDH1基因突变灵敏可靠,适合临床分子诊断。

作者王丹慧 ^[1] 蔡彦宁 ^[1] 张燕莉 ^[1] 高杰 ^[1] 杨彩侠 ^[1] 学术成果认领

作者单位首都医科大学宣武医院神经生物学研究室教育部神经变性病重点实验室北京市老年病医疗研究中心,北京,100053 ^[1]

关键词异柠檬酸脱氢酶1 焦磷酸测序法突变 isocitrate dehydrogenase 1 pyrosequencing mutation

主题词突变(Mutation)异柠檬酸脱氢酶(Isocitrate Dehydrogenase)基因(Genes)方法(Methods)质粒(Plasmids)

分类号 Q754

栏目名称 基础研究

DOI 10.3969/j.issn.1006-7795.2014.02.016

发布时间 2014-05-06

基金项目

国家自然科学基金 教育部新世纪优秀人才计划 北京市卫生系统高层次人才基金(008-0023)。@@@@This study was supported by the National Natural Science Foundation of China the Program for New Century Excellent Talents in University Beijing Health and Technical Personal of High-level Plan