换一批膀胱平滑肌细胞乙酰胆碱M3受体干扰RNA慢病毒载体的构建
Construction of small interference RNA lentiviral Vector for M3 muscarinic acetylcholine receptor gene of bladder smooth muscle cells
摘要目的 构建膀胱平滑肌细胞(bladderSmoothmusclecllS,BSMCS)M3型受体干扰RNA慢病毒载体.方法 合成4条M3受体干扰序列,构建GV118-Sh-M3慢病毒载体,测序验证序列.将GV118-sh-M3慢病毒载体与质粒pHelperl.0、pHelper 2.0三个载体共转染293T细胞,收集病毒颗粒并用荧光法检测4组病毒滴度.体外原代培养BSMCs,4组GV118-sh-M3慢病毒(KD1、KD2、KD3和KD4)转染BSMCs,观察绿色荧光蛋白表达并通过RT-PCR、Western blotting法检测各组干扰效率.结果 成功构建4个GV118-sh-M3慢病毒载体,测序结果符合设计序列.4组GV118-sh-M3慢病毒滴度分别为2 × 108、6 × 108、5 × 108和5 × 108TU/mL.分别转染BSMCs后,KD1组绿色荧光蛋白表达量最高且干扰效率最高.结论 成功包装并筛选了 GV118-sh-M3慢病毒载体,为后续进一步研究干扰M3受体在神经源性膀胱中的作用奠定了基础.
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关键词
神经源性膀胱M3型乙酰胆碱受体慢病毒载体RNA干扰neurogenic bladderM3 muscarinic acetylcholine receptorlentiviral vectorRNA interference
医学主题词
病毒(Viruses)膀胱(Urinary Bladder)肌细胞, 平滑肌(Myocytes, Smooth Muscle)乙酰胆碱(Acetylcholine)受体, 胆碱能(Receptors, Cholinergic)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1006-7795.2018.03.016
发布时间
2018-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
北京市教育委员会科技发展计划面上项目（(KM201410025016)）
This study was supported by Scientific Research Common Program of Beijing Municipal Commission of Education （(KM201410025016)）
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