换一批维甲酸和甲状腺激素在骨髓间充质干细胞软骨分化中的作用
Role of retinoic acid and thyroid hormone in chondrogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells
摘要目的 探讨甲状腺素(thyroxine,T3)和维甲酸(retinoic acid,RA)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)软骨形成的影响.方法 在 3 种条件培养基中培养和诱导猪BMSCs成软骨分化:对照组使用软骨生成培养基(含10-7 mol/L地塞米松和 10 ng/mL转化生长因子β1),RA组采用软骨生成培养基加 1 μmol/L RA,T3 组采用软骨生成培养基加100 nmol/L T3.采用MTT法单层检测BMSCs的增殖情况.收获第3 代BMSCs,离心形成细胞颗粒,分为3 组分别进行软骨细胞诱导.4 周后采集 3 组的细胞颗粒,通过组织学染色和半定量基因表达分析进行软骨形成评估.结果 T3 组BMSCs增殖高于对照组(P<0.05);RA组BMSCs增殖低于对照组(P<0.05);对照组BMSCs颗粒中观察到软骨特征的类腔隙结构和甲苯胺蓝阳性染色,RA组未见;RA组软骨发生标志基因Col Ⅱ、蛋白聚糖(aggrecan)和Sox9 的表达与对照组相比显著降低,而肥大标志基因ColX的表达在RA组显著增加,成骨相关基因Col Ⅰ和Runx2 的表达也明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);T3 组Col Ⅱ、aggrecan和Sox9 的表达显著增加,Col X的表达也显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),2 组间Col Ⅰ和Runx2 表达,差异无统计学意义(P>0.05).结论 RA可抑制BMSCs的增殖和软骨形成,T3 可促进BMSCs的增殖和软骨形成,但可诱导软骨细胞肥大.
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