微小RNA-338-3p通过ERBB2调节卵巢癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭
Micro RNA-338-3p regulates proliferation,apoptosis,migration,and invasion of ovarian cancer cells through ERBB2
摘要目的 探究微小RNA(microRNA,miR)-338-3p靶向人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,ERBB2)对卵巢癌(ovarian cancer,OC)细胞生物学行为的影响.方法 收集45例OC患者的癌组织及癌旁组织并检测miR-338-3p、ERBB2 表达水平.体外培养 A2780、SKOV3、OVCAR3、IOSE-80 细胞,分析比较 miR-338-3p、ERBB2 表达,并分析 miR-338-3p与ERBB2的靶向关系.选择A2780进行后续实验,分为A2780组(正常A2780细胞);阴性对照(negative control,NC)组(A2780细胞转染 miR-NC);miR-338-3p 组(转染 miR-338-3p 模拟物);pcDNA3.1+miR-338-3p 组(转染 miR-338-3p 模拟物+pcDNA3.1);miR-338-3p+ERBB2 组(转染 miR-338-3p 模拟物+pcDNA3.1-ERBB2).细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞仪测定凋亡率;Transwell小室测定细胞侵袭和迁移,免疫印迹法测定ERBB2蛋白及增殖、凋亡相关蛋白表达.A2780细胞注射至裸鼠右腋窝,记为模型组、NC组、miR-338-3p组、pcDNA3.1+miR-338-3p组、miR-338-3p+ERBB2组,每组6只.饲喂6周后,处死小鼠取肿瘤组织,测量体积和质量.免疫组化法分析肿瘤组织中ERBB2表达.结果 OC组织及细胞系中miR-338-3p表达低于癌旁组织和IOSE-80细胞,ERBB2 mRNA及蛋白表达高于癌旁组织和IOSE-80细胞(P<0.05).miR-338-3p和ERBB2存在靶向关系,miR-338-3p负调控ERBB2表达.转染miR-338-3p模拟物后A2780细胞增殖、侵袭和细胞迁移数、ERBB2、B 淋巴细胞瘤 2(B-cellymphoma-2,Bcl-2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶 1/2(phosphorylation extracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)、基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达降低,细胞凋亡率和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,bax)表达增加(P<0.05).转染ERBB2过表达质粒可增加A2780细胞增殖、侵袭和细胞迁移数以及ERBB2、Bcl-2、p-ERK1/2、MMP-9表达,降低bax表达和细胞凋亡率(P<0.05).与模型组、NC组比较,miR-338-3p组肿瘤质量、体积及肿瘤组织中ERBB2表达降低(P<0.05),与miR-338-3p组、pcDNA3.1+miR-338-3p组比较,miR-338-3p+ERBB2组肿瘤质量、体积及肿瘤组织中ERBB2表达增加(P<0.05).结论 miR-338-3p可能靶向调控ERBB2,从而抑制OC细胞生长和凋亡等行为.
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