换一批摘要目的:建立小鼠胚胎成纤维细胞饲养层最佳分离培养及丝裂霉素C(MMC)处理的方法,用于培养胚胎干细胞.方法:取不同胎龄的胎鼠分离原代成纤维细胞,观察不同胎龄和培养、分离条件对细胞增殖的影响:观察不同浓度和不同作用时间下MMC对细胞增殖的抑制作用.用MTI法测定细胞增殖的数量.取妊娠3.5 d的囊胚在经MMC处理的饲养层上培养,观察胚胎干细胞集落生成情况.结果:制备小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄是12.5～14.5 d:室温条件下,0.25%胰蛋白酶消化时间最好在3～5min之内:原代细胞培养2～4 d后即可传代,MMC能抑制胚胎成纤维细胞的增殖,最佳的作用浓度和时间是20μg/ml,2～4 h,成纤维细胞饲养层可以维持10 d.囊胚在饲养层上能发育成典型的"鸟巢"状干细胞集落.结论:从12.5～14.5 d胎龄小鼠胚胎分离培养的胚胎成纤维细胞质量最佳,经20μg/ml MMC处理2～4 h后,可以作为饲养层用于胚胎干细胞的分离克隆.
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分类号
Q952
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-7554.2005.05.007
发布时间
2005-06-30
基金项目
山东省优秀中青年科学家科研奖励基金（02BS042）
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