换一批SARS病毒刺突蛋白与TAP标签在Vero细胞内的融合表达研究
Expression of SARS-associated coronavirus spike protein fused with tandem affinity purification (TAP) tag in Vero cells
摘要目的:探讨SARS冠状病毒(SARS-CoV)刺突蛋白(Spike protein,S蛋白)与钙调蛋白结合肽(calmodulin binding peptide,CBP)-蛋白A串连亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)标签在Vero细胞内的融合表达及亚细胞定位,为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础.方法:从质粒pGEM-4Z-S中扩增S片段,在5'端加入Kozak序列,并与TAP标签基因共同插入pcDNA3.1(-)中,构建出真核表达载体pcDNA3.1-S-TAP(C).将构建好的质粒瞬时转染Vero细胞,并共感染重组痘苗病毒vTF7-3,用间接免疫荧光及Western-blotting技术检测融合蛋白的表达及亚细胞定位.结果:成功构建出真核表达载体pcDNA3.1-S-TAP(C),瞬时转染Vero细胞后S-CBP-蛋白A融合蛋白[S-TAP(C)]得到表达,重组痘苗病毒vTF7-3可有效增强该融合蛋白的表达水平,且检测到S-TAP(C)融合蛋白表达于细胞膜上.结论:S蛋白与TAP标签融合蛋白表达于细胞膜上,且vTF7-3的感染有助于靶蛋白表达水平的提高,可用于S蛋白结合蛋白的筛选.
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发布时间
2005-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30340025）
国家高技术研究发展计划（863计划）（2003AA208209）
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