换一批真核表达载体pVAX1-mSLC的构建及在COS-7细胞中的表达
Construction of the expression vector pVAX1-mSLC and its expression in COS-7 cells
摘要目的:构建小鼠次级淋巴组织趋化因子(mSLC)高效真核细胞表达载体pVAX1-mSLC.方法:用BamH Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切重组克隆pMD-mSLC,胶回收约410 bp的SLC基因片段,以亚克隆法构建于真核表达载体pVAX1的相应酶切位点.转化后进行菌落PCR分析和HinDⅢ酶切鉴定.阳性克隆提取质粒,体外电穿孔法转染COS-7细胞,用Western blot检测转染细胞中mSLC的瞬时表达.结果:菌落PCR和HinDⅢ酶切鉴定证实,mSLC基因片段正确插入到真核表达载体pVAX1中.Western blot检测表明,以重组质粒pVAX1-mSLC转染的COS-7细胞能表达mSLC,表达产物的相对分子量同预期的结果相一致.结论:成功地构建小鼠SLC基因的真核表达质粒pVAX1-mSLC,用它转染COS-7细胞后,能瞬时表达mSLC,为下一步mSLC的肿瘤基因治疗研究奠定了基础.
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分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-7554.2005.09.003
发布时间
2005-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30371304）
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