换一批
换一批弓形虫表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因在毕赤酵母中的分泌表达
Secretive expression of toxoplasma major surface antigen P30 fusion protein with cholera toxin A2/B in Pichia pastoris
摘要目的:探讨毕赤酵母能否高效表达具有生物学活性的弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B重组蛋白(P30-CTA2/B).方法:将目的基因定向亚克隆入pGAPZαA表达载体,构建酵母表达载体pGAPZαA-P30-CTX;线性化重组酵母表达载体,电穿孔法导入毕赤酵母GS115,抗生素Zeocin筛选、PCR法鉴定阳性转化子;酵母工程菌摇瓶表达,取上清液行SDS-PAGE和Western blotting分析.结果:在毕赤酵母菌中分泌表达P30-CTA2/B重组蛋白,产量高达0.57 g/L;SDS-PAGE显示其在49000处有一条明显表达蛋白条带,Western blotting显示表达蛋白具有P30抗原特异性.结论:大量具有免疫活性的P30-CTA2/B重组蛋白在毕赤酵母中表达,为弓形虫亚单位复合疫苗的研制和大规模动物实验创造了条件.
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分类号
R382.5
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1671-7554.2005.09.004
发布时间
2005-11-10
基金项目
国家自然科学基金
教育部留学回国人员科研启动基金
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