换一批
换一批白血病细胞株KG-1中Mxi1基因突变的检测和表达载体的构建
Detection of the Mxil gene mutation and construction of the expression vector in the leukemia cell line KG-1
摘要目的 检测白血病细胞株KG-1中Mxi1基因SID和bHLHzip区突变情况并构建Mxil基因的野生型和突变型真核表达载体,观察其转染真核细胞后基因表达的情况.方法 应用RT-PCR和SSCP分析KG-1细胞株Mxil基因的突变,将Mxi1野生型/突变型基因cDNA插入到pDs-red2-N1质粒中,构建pDs-red2-N1/Mxi1(野生型/突变型)真核表达载体,采用脂质体方法将质粒转染COS-7细胞,流式细胞仪检测红色荧光蛋白表达并计算转染效率.RT - PCR检测转染后Mxi1基因的表达.结果 Mxi1基因突变位于HelixⅡ区第82编码子的CAT/TAT(His/Tyr).成功构建pDs-red2-N1/Mxi1( 野生型/突变型)真核表达载体,经酶切、电泳可以看到在4 700、1 84.5bp存在两条电泳条带,Mxi1基因在COS-7细胞中得到表达,转染后COS-7细胞红色荧光蛋白表达的阳性细胞为18.07%,表达高峰出现在转染后第3天,并可持续表达6d左右.结论 Mxi1基因的高度保守区域bHLHzip存在基因突变,Mxi1突变基因的真核表达载体构建成功,并成功转染真核细胞COS-7.
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