换一批
换一批摘要目的 构建Ⅰ型主要组织相容性复合体(MHC-Ⅰ)重组腺相关病毒载体(rAAV).方法 合成内质网滞留型MHC-Ⅰ细胞内抗体的基因片段,测序正确后酶切获取该胞内抗体的基因片段,将该基因片段插入质粒pSSHG/CMV的EcoR Ⅰ-BamH Ⅰ位点构建pSSHG/MHC-Ⅰ.用磷酸钙共沉淀法将腺病毒辅助质1粒pFG140、包装质粒pAAV/Ad及已构建的pSSHG/MHC-Ⅰ三质粒在293细胞系中同源重组包装rAAV.采用地高辛标记的斑点杂交方法测定rAAV滴度.结果 成功构建了重组病毒质粒pSSHG/MHC-Ⅰ及人类MHC-Ⅰ胞内抗体重组腺相关病毒载体(rAAV-MHCI),经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分,梯度稀释测得滴度为6.88×1010PFU/mL.结论 通过分子克隆体外重组技术成功构建了rAAV-MHCI,为下一步人体细胞实验及移植免疫的基因治疗奠定了基础.
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