换一批
换一批CCKAR与下游效应器融合蛋白的偏向性信号通路探讨
Exploration of the biased signaling pathway of the fusion protein of CCKAR and downstream effector
摘要目的 探讨胆囊收缩素A受体(CCKAR)的偏向性信号通路,设计治疗糖尿病的特异性药物,为其他G蛋白偶联受体(GPCR)偏向性信号通路的研究提供新思路.方法 构建受体与Gα亚单位(Gs、Gq)或者β-arrestin-1之间的融合蛋白,研究其偏向性信号通路.在确保融合蛋白能够正常表达的前提下,采用环磷酸腺苷(cAMP)累积实验检测细胞在硫化缩胆囊素八肽(CCK-8s)刺激后细胞内cAMP含量的变化;采用钙成像技术检测细胞在CCK-8s刺激后细胞内钙离子的变化;采用免疫印迹技术检测细胞在CCK-8s刺激后细胞外调节蛋白激酶(pERK)和Bcl-2死亡启动子(pBad)的磷酸化情况.结果 融合蛋白质粒(CCKAR-Gs/Gq/β-arrestin-1)能够在HEK293细胞系中稳定表达;CCKAR-Gs融合蛋白可以产生高的cAMP信号,非融合蛋白CCKAR产生低的cAMP信号,而CCKAR-Gq/β-arrestin-1不引起cAMP信号;CCKAR-Gq具有更强的钙离子信号;CCKAR-β-arrestin-1 具有特异的信号偏向性,显著提升下游ERK蛋白和Bad蛋白的磷酸化水平.结论 人工构建的CCKAR融合蛋白能够有效、偏向性地激活CCKAR的下游信号通路,可以选择性地行使不同信号通路调控的生理功能.
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关键词
胆囊收缩素A受体融合蛋白GsGqβ-arrestin-1硫化缩胆囊素八肽Cholecystokinin A receptorFusion proteinGsGqβ-arrestin-1Sulfated cholecystokinin fragment 26-33 amide
分类号
R918
栏目名称
基础医学
DOI
10.6040/j.issn.1671-7554.0.2023.0120
发布时间
2023-07-24
基金项目
国家自然科学基金
山东省自然科学基金
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