摘要目的 探究Toll样受体 4(toll-like receptor 4,TLR4)是否通过调控程序性坏死及铁死亡进一步影响对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)肝损伤过程及其发生机制.方法 体外培养人正常肝细胞L-02,采用CCK-8 法检测细胞活力,筛选出最佳APAP和TAK-242 浓度.将实验分为对照组、APAP组(1、4、12 h)和APAP+TAK-242 组(1、4、12 h),比较各组细胞 TLR4 mRNA表达;检测各组细胞匀浆液的丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotrans-ferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;检测各组细胞核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;检测各组细胞高迁移率族蛋白 1(high mobility group box 1,HMGB1)、受体相互作用蛋白激酶 1(receptor interacting protein kinase 1,RIP1)、受体相互作用蛋白激酶 3(receptor interacting protein kinase 3,RIP3);检测各组细胞内Fe2+含量以及NF-κB、P53、重组溶质载体家族7 成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(glutathione peroxidase 4,GPX4)水平.结果 通过CCK-8 法,确定 5 mmol/L APAP和 100 nmol/L TAK-242 作为后续实验浓度.与对照组比较,各时间点APAP组TLR4 mRNA水平上调(P<0.05);与APAP组比较,同一时间点APAP+TAK-242 组TLR4 mRNA水平下调(P<0.05/3=0.016 7).与对照组比较,各时间点APAP组ALT、AST水平升高(P<0.05);与APAP组比较,同一时间点APAP+TAK-242 组ALT、AST水平下降(P<0.05/3=0.0167).与对照组比较,各时间点APAP组NF-κB、IL-6、TNF-α mRNA表达均上调(P<0.05);与APAP组比较,同一时间点APAP+TAK-242 组NF-κB、IL-6、TNF-α mRNA表达均下调(P<0.05/3=0.0167).与对照组比较,各时间点APAP组HMGB1、RIP1、RIP3 蛋白水平均升高(P<0.05);与APAP组比较,同一时间点APAP+TAK-242组HMGB1、RIP1、RIP3 蛋白水平均降低(P<0.05/3=0.0167).与对照组比较,各时间点APAP组Fe2+含量、NF-κB和P53 蛋白水平均上升(P<0.05),而SLC7A11 和GPX4 蛋白水平和mRNA表达均降低(P<0.05);与APAP组比较,同一时间点APAP+TAK-242 组Fe2+含量、NF-κB和P53 蛋白水平均降低(P<0.05/3=0.0167),而SLC7A11 和GPX4 蛋白水平和mRNA表达均升高(P<0.05/3=0.0167).结论 抑制TLR4 可通过调节TLR4/HMGB1 信号通路下调程序性坏死,以及可能通过调节TLR4/NF-κB信号通路下调炎症反应和铁死亡来减轻APAP肝损伤.