摘要目的 探讨缺氧条件下γ-氨基丁酸(gama-aminobutyric acid,GABA)能系统在人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中的作用及其机制,为防治缺氧相关视网膜疾病提供理论依据.方法 分离并培养人RPE细胞,采用RT-PCR法、Western blotting法检测GABA相关分子[谷氨酸脱羧酶65/67(glutamic acid decar-boxylase 65/67,GAD65/67)、γ-氨基丁酸转氨酶(GABA transaminase,GABA-T)、囊泡性GABA转运体(vesicular GABA transporter,VGAT)、GABA转运体 1/2(GABA transporters 1/2,GAT-1/2)]的表达.利用免疫荧光技术检测人RPE细胞及人视网膜组织中GAD67、GABA-T和GAT-2 的表达与定位.将RPE细胞暴露于缺氧环境中(1%O2,37℃,48h),检测GAD67、GABA-T和GAT-2表达变化、单层细胞通透性和紧密连接蛋白(zonula occlu-dens-1,ZO-1)水平.将细胞分为常氧空载体对照组、常氧基因过表达组、低氧空载体组以及低氧基因过表达组.通过腺病毒载体分别过表达GAD67、GABA-T或GAT-2,评估其对缺氧诱导的RPE细胞屏障功能损伤的影响.结果 人RPE细胞表达GAD67、GABA-T和GAT-2,但未检测到GAD65、VGAT和GAT-1 的表达.与常氧对照组相比,低氧组各基因蛋白GAD67[(17.54±6.89)%,t=2.595,P<0.05]、GABA-T[(18.64±3.56)%,t=3.563,P<0.01]和GAT-2[(31.79±8.49)%,t=4.147,P<0.01]表达显著下调;同时单层RPE细胞的通透性增加[(78.83±34.79)%,t=-3.222,P<0.05],ZO-1水平降低[(22.24±8.31)%,t=3.217,P<0.01].与低氧空载体对照组相比,低氧过表达GAD67 或GABA-T组中升高的RPE细胞通透性减轻了(21.97±11.02)%和(21.40±7.65)%,差异有统计学意义(FGAD67=14.146,FGABA-T=35.715,PGAD67<0.05,PGABA-T<0.01).与低氧空载体对照组相比,低氧GAT-2 过表达组在无外源 GABA 添加时未表现出明显保护作用(组间P=0.001,P>0.05,),但在加入外源 GABA 后,GAT-2过表达使得缺氧诱导下的RPE细胞通透性下降了(34.49±14.70)%(F=20.084,P<0.01).此外,GAD67、GABA-T和GAT-2的过表达均未能逆转缺氧导致的ZO-1蛋白降低.结论 人RPE细胞表达GABA能系统.在缺氧条件下,GABA能相关蛋白表达降低并伴随屏障功能损伤.增强GAD67、GABA-T表达可显著改善缺氧诱导的RPE细胞屏障功能异常,GAT-2过表达在补充外源GABA时亦有保护作用,提示GABA能系统可能成为改善缺氧相关视网膜疾病RPE屏障功能的潜在靶点.