换一批
换一批结肠癌SW480细胞中miR-142-3p靶基因的确定及意义
Identification of target gene TCF7 of miR-142-3p in colon cancer cells SW480
摘要目的 确定结肠癌SW480细胞中miR-142-3p的靶基因,探讨miR-142-3p与其靶基因的相互作用.方法 通过miRNA数据库预测可能与miR-142-3p相互作用的靶基因,构建miR-142-3p及阴性对照序列;将miR-142-3p、对照序列、TCF7的3'非翻译区(3'UTR)以及突变的TCF7 3'UTR分别克隆到表达载体上,共转染SW480细胞,36 h后检测绿色荧光蛋白的表达水平;Trizol抽提RNA,RT-PCR检测TCF7 mRNA表达水平;Western blot检测TCF7蛋白表达水平.结果 生物信息学方法预测TCF7可能为miR-142-3p的靶基因,进一步双荧光素酶报告实验验证了miR-142-3p可以与TCF7的3'UTR结合,阻断TCF7蛋白翻译过程,从而下调TCF7的蛋白水平.结论 TCF7可能为miR-142-3p的靶基因,miR-142-3p通过转录后负调控靶基因TCF7蛋白的表达.
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