换一批
换一批摘要目的 优化HepG2细胞电转染条件,进一步提高HepG2细胞的转染效率.方法 采用电穿孔方法将pcDNA3.1-EGFP导入HepG2细胞中,在500 μL电转染体系中,在不同电场强度、细胞数目、脉冲频率、脉冲时间、电转质粒数目、电转缓冲液、培养基血清浓度条件下,分别将pcDNA3.1-EGFP质粒电转染HepG2细胞,检测不同条件下细胞存活率和转染率.结果 电转前4℃孵育电转体系混合液10 min,方波电转条件在1个电脉冲、电压270V、细胞数为2×106个、质粒20 μg、脉冲时间20 ms、电转缓冲液为优化缓冲液、电转后置于37℃、含15％ FBS的DMEM高糖培养基中培养48 h,可获得高转染率(60.68±1.87)％.结论 优化电穿孔法的电转染条件能够有效提高HepG2细胞的电转染效率.本研究为外源基因电转染HepG2细胞提供了可靠的试验参数.
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