卵巢癌CD＋90肿瘤细胞的分离及其肿瘤干细胞生物学特性观察

Isolation of CD+90 tumor cells and observation of their cancer stem cell property in ovarian cancer

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摘要目的：分离人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞中的CD＋90细胞，并观察其肿瘤干细胞的生物学特性。方法从卵巢癌患者腹水中分离原代卵巢癌细胞，采用流式细胞术检测人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞的CD133、CD90阳性率。流式分选得到CD＋90、CD－90细胞后，采用RT-PCR法检测其干细胞及上皮间质化（EMT）相关基因mRNA相对表达，Transwell小室侵袭试验观察细胞侵袭力，克隆形成试验观察细胞增殖分化能力，悬浮成球试验观察干细胞潜能，免疫缺陷小鼠体内有限稀释成瘤试验观察成瘤时间和成瘤率。结果人卵巢癌细胞系SKOV3的CD133和CD90阳性率均低于原代卵巢癌细胞，P均＜0．05。在人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞中，CD＋90细胞干细胞相关基因（CD133、OCT4）和EMT间质标志相关基因（N-cadherin、Vimentine、MMP9）相对表达、穿到膜背面的细胞数、细胞克隆数、悬浮成球数均高于CD－90细胞，EMT上皮标志相关基因E-cadherin相对表达均低于CD－90细胞，P均＜0．05。随着接种细胞数目的增加，CD＋90、CD－90细胞的成瘤率和成瘤时间均升高，CD＋90细胞升高更明显。结论卵巢癌细胞中，CD＋90细胞高表达间质属性基因和干细胞相关基因，具备更高的侵袭力、增殖分化能力、体内成瘤能力和干细胞潜能，CD＋90细胞分离可能成为卵巢癌干细胞分离的新方法。