RIPK3基因转染的 SH-SY5Y 细胞中 HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化

Expression changes of HIF-1αand its signaling pathway related gene in SH-SY5 Y cells transfected by RIPK3 gene

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摘要目的：观察受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α（ HIF-1α） mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的pCMV6-AC-GFP质粒（重组质粒），培养SH-SY5Y细胞，分为实验组及对照组，分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白，分别于培养8、14、20、26、32、38 h后，通过MTT实验检测细胞增殖情况（ OD值）。采用转录组测序技术（ RNAseq）及Ingenuity Pathway Analysis（ IPA）软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR（ ddPCR）检测两组细胞中的HIF-1αmRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量（0．806±0．0975）高于对照组（0．455±0．0886），P＜0．05。随培养时间延长，实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1αmRNA相对表达量（0．01543±0．00347）低于对照组（0．04628±0．01026），P＜0．05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中，筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白（ UBC）、希佩尔－林道蛋白（ VHL）、转录延伸因子B多肽1（ TCEB1）、血管内皮生长因子A（ VEGFA）。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后，细胞中HIF-1αmRNA表达下调，同时HIF-1α信号通路相关基因（ UBC、VHL、TCEB1、VEGFA）的表达水平受到影响。