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Eμ-VH 启动子调控 c-Myc 表达慢病毒载体的构建及其体外功能

Construction and function of a lentiviral vector harboring c-Myc gene under the control of Eμ-VH promoter

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摘要目的：构建人 B 淋巴细胞特异性启动子 Eμ-VH 调控癌基因 c-Myc 表达的慢病毒载体（pEMIR），并探讨其体外功能。方法以 pLV-c-Myc-IRES-增强绿色荧光蛋白（EGFP）为模板，经 PCR 扩增、酶切后得到 pEVCHR；以pEVCHR 为模板，PCR 扩增、酶切后得到慢病毒载体 pEMIR，并行测序和酶切鉴定。将 pEMIR 分别瞬时转染入人源胚胎肾细胞293T、人弥漫大 B 细胞淋巴瘤细胞株（OCL-Ly3、OCL-Ly10），倒置荧光显微镜检测各细胞 EGFP 和单体红色荧光蛋白（mRFP）的表达，用 qRT-PCR 法检测细胞内 c-Myc mRNA 表达，用 Western blotting 法检测293T 细胞c-Myc 蛋白表达。结果Eμ-VH-c-Myc-H2BmRFP 基因片段电泳结果与预测值4129 bp 相符，Vector DNA 电泳可见一条带与预测值8561 bp 相符；pEMIR 酶切并电泳的结果与理论预测值相符；对 pEMIR 质粒进行测序，结果与预期相符，证明 pEMIR 构建成功。三种细胞经 pEMIR 转染后，倒置荧光显微镜下可见绿色和红色荧光，同时转基因c-Myc表达正常。结论成功构建 Eμ-VH 启动子调控 c-Myc 表达的慢病毒载体，体外实验证明该载体能够在人正常细胞和肿瘤细胞中均可发挥功能。