沙蟾毒精对骨肉瘤U2OS细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制

Effects of arenobufagin on proliferation and apoptosis of osteosarcoma cell line U2OS

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摘要目的观察沙蟾毒精对人骨肉瘤细胞系U2OS增殖、凋亡、侵袭的影响,并探讨其作用机制.方法以人骨肉瘤细胞系U2OS作为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度(0、25、50、75、100、125、150、175、200 nmol/L)沙蟾毒精对U2OS细胞增殖的影响,并筛选出合适给药浓度进行后续实验;采用Hoechst 33258染色,观察U2OS细胞凋亡的形态学变化;采用Transwell侵袭实验检测沙蟾毒精对U2OS细胞侵袭能力的影响;采用实时荧光定量PCR技术检测沙蟾毒精对U2OS细胞凋亡相关基因(Bax、caspase-3)、抗凋亡相关基因(Bcl-2)及侵袭相关基因(MMP-2、MMP-9)mRNA表达的影响.结果 CCK-8细胞毒性实验表明,随着沙蟾毒精浓度升高,其对U2OS细胞的抑制率逐渐增加(P均<0.05).Hoechst 33258染色结果显示,50、100、150 nmol/L沙蟾毒精处理细胞数量减少且出现核固缩、碎裂和凋亡小体形成.Transwell侵袭实验结果显示,随沙蟾毒精(0、50、100、150 nmol/L)浓度升高,U2OS细胞透膜数逐渐减少(P均<0.05).与0 nmol/L相比,50、100、150 nmol/L沙蟾毒精处理细胞后Bax、caspase-3 mR-NA表达增加,Bcl-2、MMP-2、MMP-9 mRNA表达减少(P均<0.05).结论沙蟾毒精能抑制U2OS细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制与促进Bax、caspase-3表达和抑制Bcl-2表达有关;能抑制细胞侵袭,其机制与抑制MMP-2和MMP-9表达有关.