lncRNA-MEG3敲低人子宫平滑肌瘤细胞株增殖凋亡、克隆形成、细胞周期变化及与miR-93靶向关系

Effects of lncRNA-MEG3 knockdown on proliferation,apoptosis,clone formation and cell cycle,and the targeted relationship between lncRNA-MEG3 and miR-93 in human uterine leiomyoma cells

二维码有效期 120s

摘要目的观察敲低长链非编码核糖核酸-MEG3(lncRNA-MEG3)对人子宫平滑肌瘤(UL)细胞株的增殖凋亡、克隆形成、细胞周期的影响,并分析lncRNA-MEG3与微小核糖核酸-93(miR-93)的靶向关系.方法体外培养人UL细胞株SK-UT-1,细胞分为lncRNA-MEG3敲低组和敲低阴性对照组,分别转染lncRNA-MEG3敲低质粒和敲低阴性对照质粒至两组细胞,采用qRT-PCR法检测细胞中lncRNA-MEG3和miR-93,CCK8法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,Western blotting法检测增殖相关蛋白(Ki67、PCNA蛋白)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2蛋白)及Wnt/β-catenin通路相关蛋白(Wnt3a、β-catenin蛋白).采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA-MEG3和miR-93的靶向关系.结果与敲低阴性对照组比较,lncRNA-MEG3敲低组细胞lncRNA-MEG3表达降低,miR-93表达升高,48、72、96 h时OD值降低,克隆形成数目减少,G0/G1期占比增加,G2/M期占比下降,凋亡率升高,Wnt3a、β-catenin、Ki67、PCNA、Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高(P均<0.05).lncRNA-MEG3能靶向miR-93从而降低相对荧光素酶活性(P<0.05).结论敲低lncRNA-MEG3能够抑制SK-UT-1细胞的增殖、克隆形成及Wnt/β-catenin通路,将细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,从而抑制细胞生长,lncRNA-MEG3与miR-93存在靶向关系.