换一批角膜基质细胞体外长期培养过程中生物学特性的改变
Changes in biological characterization of corneal stromal fibroblasts during long term in vitro cultivation
摘要目的研究兔角膜基质细胞在体外长期培养传代过程中,细胞增殖能力和胞外基质表达水平的改变.方法取体外培养兔角膜基质细胞,由光镜对各代细胞的形态学变化进行观测.通过对各代细胞生长曲线的绘制,得出其各自的群体倍增时间;MTT法比较各代细胞增殖能力的改变.RT-PCR和Western杂交检测各代细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平的改变;爱茜蓝法检测糖胺聚糖(GAG)的含量.结果体外培养兔角膜基质细胞随着传代的进程,逐渐显现衰老的形态特征.细胞群体倍增时间由第7代起显著延长(P＜0.01);MTT比色法的结果亦显示,第7代细胞的增殖能力开始大幅下降(P＜0.01).第9～11代时,Ⅰ、Ⅲ型胶原在mRNA和蛋白水平的表达都有明显减少(P＜O.01),降至第1代细胞的30%左右;GAG的含量也降至40%左右.结论兔角膜基质细胞经历长期体外培养后,细胞增殖能力和胞外基质表达水平显著下降,逐渐丧失原有的功能.但作为构建组织工程化角膜的种子细胞,在它的生物学特性未发生改变之前,经3次传代培养,获取的细胞量达到组织块消化所得细胞的240倍左右,已足以用于构建之用.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1674-8115.2004.04.021
发布时间
2004-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点基础研究发展计划(973计划)（(1999054309)）
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