摘要目的 初步探讨低氧对PC12细胞自噬功能的影响.方法 应用低氧培养箱给予实验组细胞1%氧浓度的低氧处理,对照组置于正常含氧的培养箱中.首先,实验组细胞分别低氧处理6、12、24 h,用Western blotting检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达,用RT-PCR检测LC3 mRNA的变化,用透射电子显微镜(透射电镜)检测自噬小体的变化;其次,给予自噬抑制剂3-MA后,用MTT检测细胞活力,用caspase3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性,用Western blotting方法检测cleaved caspase-3的表达.结果 ①随着低氧时间延长,PC12细胞自噬相关蛋白LC3及Beclin1表达增高,12 ~24 h最高,随后下降,LC3 mRNA水平也出现相应增高趋势.②给予自噬抑制剂3-MA能进一步降低低氧处理后细胞活力,而caspase-3的活性增强,其活性形式表达增高.结论 自噬在PC12细胞发生低氧被激活,并且可能通过抑制凋亡发挥保护作用.
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