换一批
换一批敲减干扰素调节因子3对脂多糖刺激Raw 264.7细胞核内Irak1bp1表达的影响
Effects of IRF3 knockdown on the nuclear expression of Irak1bp1 protein in LPS-stimulated Raw 264.7 cells
摘要目的·扩增干扰素调节因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)腺病毒,并研究该病毒对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激诱导Raw264.7细胞核内白介素受体相关激酶1结合蛋白1(interleukin-1 receptor associated kinase 1 binding protein 1,Irak1bp1)表达的影响.方法·IRF3 shRNA腺病毒的扩增在人胚肾293 T(HEK293T)细胞中进行,并采用TCID 50法测定病毒滴度.Raw 264.7细胞随机分为4组,1组为腺病毒(-)LPS(-),2组为腺病毒(-)LPS(+),3组为腺病毒(+)LPS(-),4组为腺病毒(+)LPS(+).细胞IRF3基因表达采用real-time PCR方法检测;核内IRF3及Irak1bp1的表达采用Western blotting方法检测.结果·经计算扩增腺病毒滴度为2.2×1011PFU/mL,最佳MOI为300.LPS刺激后Raw 264.7细胞内IRF3 mRNA较对照组明显增加,核内IRF3 蛋白及Irak1bp1表达也明显增加;IRF3 shRNA腺病毒应用后,细胞对IRF3 mRNA的组成性表达及LPS刺激诱导的IRF3 mRNA和核内蛋白质表达均明显受抑,但未刺激状态下IRF3蛋白核内组成性表达无明显影响;IRF3 shRNA 腺病毒应用对细胞静息及LPS刺激诱导的核内Irak1bp1表达并无影响.结论·IRF3 shRNA腺病毒能够有效抑制LPS刺激诱导的核内IRF3的表达,但并不影响核内Irak1bp1的表达.
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关键词
干扰素调节因子3短发夹RNA腺病毒白介素受体相关激酶1结合蛋白1(Irak1bp1)脂多糖interferon regulator factor 3short hairpin RNAinterleukin-1 receptor associated kinase 1 binding protein 1 (Irak1bp1)lipopolysaccharide (LPS)
分类号
R575.3
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1674-8115.2018.06.001?
发布时间
2018-08-15
基金项目
国家自然科学基金（81770612,81070357,30660066）；
上海市松江区科技攻关项目(16SJGG57)（National Natural Science Foundation of China, 81770612, 81070357, 30660066, Songjiang District Science and Technology Research Project of Shanghai, 16SJGG57）
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