摘要目的·分析半乳糖凝集素9阳性肿瘤相关巨噬细胞(galectin-9+tumor-associated macrophages,galectin-9+TAMs)在肌层浸润性膀胱癌(muscle-invasive bladder cancer,MIBC)组织中的表型特征,探究MIBC微环境对galectin-9+TAMs的调控作用,galectin-9+TAMs抑制CD8+T细胞反应的机制及其临床治疗意义.方法·通过流式细胞术检测MIBC与癌旁组织中galectin-9+TAMs的表型特征.利用TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库筛选与LGALS9和LGALS9巨噬细胞基因集显著相关的细胞因子.用人重组细胞因子体外刺激巨噬细胞,分为人重组巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human macrophage-stimulating factor,rhM-CSF)刺激组、人重组白介素-16(recombinant human interleukin-16,rhIL-16)刺激组和人重组干扰素γ(recombinant human interferon-γ,rhIFN-γ)刺激组,并通过流式细胞术检测3组galectin-9表达情况.流式细胞术检测加入rhM-CSF中和性抗体后巨噬细胞表达galectin-9的情况.Anti-galectin-9抗体处理MIBC单细胞悬液后,通过流式细胞术检测TAMs的效应功能变化.分选癌与癌旁组织中galectin-9+TAMs和人外周血CD8+T细胞并进行体外共培养,通过流式细胞术检测CD8+T细胞效应功能变化.采用anti-galectin-9抗体和程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)抗体单独及协同处理体外培养的肿瘤组织,通过流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡及CD8+T细胞效应功能变化.结果·Galectin-9+TAMs高表达人类白细胞DR抗原(human leukocyte antigen DR,HLA-DR)、CD86、CD206和细胞程序性死亡-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1),分泌IL-10和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)增加,分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)减少.TCGA数据库筛选结果显示,M-CSF、IL-16和IFN-γ与LGALS9和LGALS9巨噬细胞基因集的相关性最显著.用rhM-CSF、rhIL-16和rhIFN-γ体外刺激巨噬细胞,rhM-CSF刺激组中galectin-9的表达显著升高,加入中和性抗体后表达显著下调.阻断galectin-9后,TAMs表型从高表达抑制性分子向促炎症分子转换,其表面表达PD-L1显著下降.体外共培养galectin-9+TAMs和CD8+T细胞后,galectin-9+TAMs能够抑制CD8+T细胞的效应功能,该作用部分依赖于galectin-9.联合阻断galectin-9和PD-1后,肿瘤细胞凋亡比例、CD8+T细胞的增殖能力和效应分子的分泌与单独阻断PD-1相比,均显著增多或增强.结论·Galectin-9+TAMs具有免疫抑制表型和功能.肿瘤来源M-CSF诱导TAMs高表达galectin-9.Galectin-9+TAMs抑制CD8+T细胞功能从而促进MIBC免疫逃逸.联合阻断galectin-9和PD-1能够更有效地重激活CD8+T细胞功能.