摘要目的·基于Cre-Loxp系统构建小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠并验证其敲除效率.方法·将Cx3cr1creERT2与Stat3fl/fl基因型小鼠多代交配繁育,直到获得足够数量的Stat3fl/fl;Cx3cr1creERT2基因型小鼠,即条件敲除小鼠(conditional knockout,CKO);同窝Stat3 fl/fl基因型小鼠,即对照小鼠(wild type,WT).利用小鼠组织提取DNA后通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),结合特异性引物分别扩增的结果来判断小鼠基因型.在CKO及WT 小鼠6周龄时通过腹腔注射他莫昔芬诱导小胶质细胞中Stat3基因的敲除;2周后,随机选取CKO小鼠(n=4)及WT 小鼠(n=4),利用磁珠分选法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选出小胶质细胞后通过实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)技术从基因水平检测基因敲除效率;通过脑组织切片免疫荧光染色标记小胶质细胞和STAT3蛋白观察小胶质细胞中STAT3的表达情况;利用流式细胞术分别检测STAT3在小胶质细胞及脾巨噬细胞中的变化.通过尼氏染色检测神经元细胞的情况;通过脑组织切片荧光染色标记小胶质细胞,观察皮层和海马区域小胶质细胞的情况;通过流式细胞术检测小胶质细胞表型.结果·成功繁育出CKO小鼠和WT小鼠.MACS后脑细胞中小胶质细胞的占比从10%提升到85%.RT-PCR结果显示,相对于WT小鼠,CKO小鼠小胶质细胞中Stat3的mRNA相对表达量为0.331 7±0.041 4,mRNA水平下调(P=0.001).脑组织免疫荧光染色结果显示,CKO小鼠小胶质细胞中STAT3蛋白的荧光强度较WT小鼠弱.脑组织流式细胞术显示:WT小鼠小胶质细胞中STAT3的阳性细胞占比为(85.30±5.69)%;CKO小鼠小胶质细胞中STAT3的阳性细胞占比为(39.70±3.88)%,STAT3表达率下降(P=0.001).脾组织流式细胞术显示,CKO小鼠与WT小鼠脾巨噬细胞中STAT3的阳性细胞占比的差异无统计学意义(P>0.05).尼氏染色显示,CKO小鼠与WT小鼠神经元细胞无显著差异.脑组织切片荧光染色结果显示,CKO小鼠与WT小鼠的小胶质细胞在形态上无明显差异.小胶质细胞流式细胞术显示CKO小鼠与WT小鼠小胶质细胞表型无显著差别.结论·成功构建小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠,为后续相关研究提供动物模型.