摘要目的·探讨缺血性脑卒中后脑血管内皮细胞Wnt7/β-catenin信号失活是否导致血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)完整性破坏,并研究内质网应激爆发是否介导了Wnt7/β-catenin通路的抑制.方法·采用线栓法阻断小鼠大脑中动脉建立大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,脑缺血60 min后拔除线栓.向MCAO模型小鼠腹腔注射内质网应激抑制剂 4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)作为 4-PBA+MCAO组.并设置假手术组(Sham组).MCAO后24 h用伊文思蓝(Evans blue,EB)测定小鼠BBB的通透性,干湿法测定脑组织含水量,免疫荧光测定小鼠脑血管内皮细胞和周细胞黏附性.对人脑微细血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMECs)进行氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)4 h,加入4-PBA培养24 h.细胞实验分为空白对照组、OGD组和OGD+4-PBA组.采用CCK-8测定细胞活力,通过检测FITC标记的牛血清白蛋白(FITC-BSA)的通过率来评估细胞通透性;通过ELISA测定HBMECs中血小板衍生生长因子β(platelet-derived growth factor β,PDGF-β)的分泌水平;采用Fluo-3 AM钙离子荧光探针检测细胞的荧光强度并评估细胞内钙离子浓度,通过CM-H2DCFDA荧光探针测量活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量以明确细胞内质网应激状态;蛋白质印迹法(Western blotting)检测HBMECs中的连接蛋白[紧密连接蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)和密封蛋白5(claudin-5)]、内质网应激蛋白[CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(cysteine-containing aspartate-specific proteases 12,Caspase-12)]、Wnt7和β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平.结果·MCAO模型小鼠脑梗死区水含量较假手术组增加,EB渗出量明显增多(均P<0.05),小鼠脑血管内皮细胞和周细胞之间的黏附性下降;腹腔注射4-PBA后MCAO模型小鼠脑水肿程度减轻,BBB的渗透性降低(均P<0.05),脑血管内皮细胞和周细胞之间的黏附性增加.与空白对照组HBMECs比较,在OGD条件下细胞活力下降,通透性增加(均P<0.05);同时,OGD组HBMECs中连接蛋白ZO-1、claudin-5的表达水平下降,PDGF-β的分泌水平减少,钙离子浓度升高,ROS含量明显上调,内质网应激蛋白CHOP、GRP78、Caspase-12的表达水平增加,Wnt7和β-catenin的表达水平下降(均P<0.05).而当HBMECs的OGD模型经4-PBA处理后,OGD导致的HBMECs损伤减轻,细胞中连接蛋白的表达水平增加,HBMECs的通透性降低,PDGF-β的分泌水平增加,并且Wnt7/β-catenin信号的活性明显恢复(均P<0.05).结论·脑卒中后脑血管内皮细胞内质网应激爆发导致Wnt7/β-catenin信号失活引起的内皮细胞损伤,是BBB破坏的关键途经.