颌骨成骨细胞调控B细胞分化的效应研究

Effect of jaw osteoblasts on B cell development via cytokine secretion

二维码有效期 120s

摘要目的·探究小鼠颌骨成骨细胞对B细胞分化发育的调控效应及具体作用机制.方法·采用优化的酶消化法制备小鼠颌骨单细胞悬液,体外诱导分化为成骨细胞.通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红S(ARS)染色验证成骨细胞的成骨潜能.通过免疫荧光染色观察小鼠颌骨组织中成骨细胞与B细胞的空间定位关系.采用流式细胞分选技术获得高纯度、高活性的造血谱系前体细胞.通过建立基于Transwell小室的共培养体系,探究不同浓度颌骨成骨细胞(5×104、2.5×105、5×105 个/孔)对B细胞分化(5×104 个/孔)发育的调节作用.通过流式细胞术及RT-qPCR检测不同浓度成骨细胞诱导下B细胞的活性与分化程度.利用RT-qPCR检测成骨细胞成骨分化过程中与B细胞发育相关的外分泌因子的表达情况.结果·成骨诱导后,ALP与ARS染色结果显示小鼠颌骨成骨细胞具有优越的成骨潜能.RT-qPCR结果显示成骨细胞内高表达成骨基因Runx2、Osx、Ocn和Alp.组织免疫荧光检测结果显示,小鼠颌骨组织内成骨细胞与B细胞在空间定位上紧密相邻.在体外共培养模型中,流式细胞分析结果显示,成骨细胞以浓度依赖性的方式促进B细胞分化与发育.RT-qPCR与细胞免疫荧光检测结果显示,成骨细胞上调B细胞发育关键基因Ebf1、Rag1、Il7r和Pax5(均P<0.001).RT-qPCR结果显示,与B细胞发育密切相关的细胞因子Il7、Baff和Flt3l在成骨细胞成骨分化的过程中显著上调(均P<0.05).结论·颌骨成骨细胞以浓度依赖性的方式促进B细胞分化与发育,成骨细胞可能通过分泌生长因子上调B细胞内分化关键基因的表达.