负载白细胞介素-4的水凝胶微球调控卒中后免疫微环境对神经功能修复的影响
Effects of hydrogel microspheres loaded with interleukin-4 on neural functional recovery by modulating the immune microenvironment after stroke
摘要目的·探讨负载免疫调控因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)的水凝胶微球(microsphere,MP)对卒中损伤后再生与修复的影响.方法·通过乳化法生成负载IL-4的纳米颗粒,并联合气流控法构建的聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)水凝胶微球制得负载IL-4的PVA水凝胶微球(MP@IL-4).使用光学显微镜对MP@IL-4的形态进行表征.体外培养BV2小胶质细胞,经MP@IL-4处理后,分别采用CCK-8法、活/死细胞染色法对其细胞活力、细胞存活进行检测.经脂多糖继续处理BV2小胶质细胞后,采用免疫荧光染色对其促炎标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和抑炎标志物精氨酸酶1(arginase 1,Arg-1)的表达水平进行分析.同时,采用大脑中动脉栓塞法构建小鼠卒中模型,随机分为假手术组(Sham组)、缺血性卒中(ischemic stroke,IS)组和微球治疗组(IS-MP@IL-4组).通过神经行为学评分、悬空旋转实验和悬丝实验评估3组小鼠的神经行为学功能,焦油紫染色检测3组小鼠的脑萎缩体积,免疫荧光染色表征3组小鼠小胶质细胞促炎因子CD86和抑炎因子CD206的表达水平.结果·光学显微镜的观察结果显示成功制备了粒径为200 μm的MP@IL-4,且不影响BV2小胶质细胞的细胞活力和存活.体外和体内实验均证实,MP@IL-4可下调小胶质细胞的促炎标志物的表达,上调抑炎标志物的表达.此外,与IS组相比,IS-MP@IL-4组小鼠的神经行为学功能有较大改善(P<0.05),脑萎缩体积也有所减小(P<0.001).结论·MP@IL-4可通过改善免疫微环境发挥对卒中后神经功能损伤的治疗作用.
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