摘要目的·通过单细胞转录组分析系统解析黏膜恶性黑色素瘤(mucosal malignant melanoma,MM)与皮肤恶性黑色素瘤(cutaneous malignant melanoma,CM)微环境的免疫组分差异,提示MM中CD8+T细胞耗竭的关键调控机制.方法·收集整合3例初治MM患者手术样本及3例CM单细胞转录组数据,共纳入36 531个细胞进行分析.数据预处理包括批次校正、严格质控(基于线粒体基因比例及基因数筛选)、无监督聚类及细胞类型注释(依据经典标记基因).进一步采用差异基因分析(Wilcoxon检验)、基因集富集分析[基于基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库]、细胞互作网络分析及癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)预后关联分析,全面解析MM与CM肿瘤免疫微环境的异质性.结果·与CM相比,MM中CD8+T细胞的细胞毒性相关基因(GZMB、IFNG等)表达降低(P＜0.001),而耗竭标志物(PDCD1、LAG3等)则显著上调(P＜0.001),同时耗竭性CD8+T细胞亚群的比例增加近6倍[(CM:3.38%)vs(MM:19.26%),P＜0.001],且终末耗竭评分更高.此外,MM微环境中的中性粒细胞浸润水平显著高于CM[(CM:1.6%)vs(MM:34.1%),P=0.009].单细胞分析进一步将其划分为5个亚群.其中,CD10+中性粒细胞亚群(占MM中性粒细胞的23.52%)同时高表达促炎分子(S100A8/A9)和免疫抑制分子(MME/CD10、CD55),且该亚群的髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)特征评分显著高于其他亚群.TCGA及MM队列分析进一步证实,该亚群的高表达基因与患者不良预后独立相关(P=0.049),提示该亚群参与肿瘤免疫抑制作用.机制上,CD10+中性粒细胞通过SELPLG-SELL配体-受体对与耗竭性CD8+T细胞互作,驱动T细胞功能失活.结论·对MM临床样本进行单细胞转录组测序,并系统比较MM与CM的单细胞免疫图谱,提示MM中CD10+中性粒细胞通过SELPLG-SELL通路诱导CD8+T细胞终末耗竭,解析了MM免疫治疗耐受的分子机制,为靶向中性粒细胞-T细胞互作提供新策略.