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大鼠下颌下腺细胞与柞蚕丝素蛋白膜体外复合培养的实验研究

Investigation of rat submandibular gland cells and antheraea pernyi silk fibroin films co-culture in vitro

摘要目的:通过大鼠下颌下腺细胞(rat submandibular gland cells,RSMGs)与柞蚕丝素蛋白(antheraea pernyi silk fibroin,ApSF)膜的体外共培养,探讨RSMGs在支架上的形态特征、黏附、增殖及分泌功能.方法:将柞蚕丝素蛋白膜、桑蚕丝素蛋白(bombyx mori silk fibroin,BmSF)膜分别接种SD大鼠的RSMGs进行共培养,并以24孔培养板单独培养的RSMGs作为阴性对照组.免疫细胞化学抗角蛋白抗体(cytokratin 8,CK8)、淀粉酶抗体(amylase)染色鉴定细胞来源:扫描电镜、荧光显微镜观察细胞支架复合生长情况;检测细胞在支架上的黏附率;MTT比色法检测材料上细胞的增殖能力;Amano法测定上清液中淀粉酶含量,检测细胞支架共培养后下颌下腺细胞的功能.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:免疫细胞化学染色观察共培养后的细胞,上皮细胞特异性抗体CK8染色阳性,腺泡上皮细胞特异性抗体Amylase染色阳性.扫描电镜可见,共培养后ApSF膜上细胞增殖活跃,表面呈现出微绒毛等超微结构,并向支架材料伸出伪足.荧光显微镜下可见,随着共培养时间的延长,支架上锚定的种子细胞数量增多,形态规则.2组支架接种细胞1h后,RSMGs开始附着于支架上且黏附率差异不显著(P>0.05);4~12 h2组黏附率逐渐增大,ApSF组较BmSF组更显著(P<0.05);24h时,95%细胞黏附于2种材料上,2组差异不显著(P>0.05).MTT提示,RSMGs与ApSF复合培养3、5 d后增殖迅速,第7天时达到峰值;ApSF组的细胞在第3、5和7天增殖速度与BmSF组差异显著(P<0.05),2组细胞增殖均与阴性对照组差异显著(P<0.05).Amano法提示,随着接种后培养时间的延长,2组淀粉酶含量均有不同程度的增加;ApSF组在第3、5、7天时唾液淀粉酶浓度与BmSF组相比有显著差异(P<0.05),2组酶浓度均与阴性对照组差异显著(P<0.05).结论:RSMGs与ApSF复合培养后,可保持细胞表型、增殖分化能力及分泌功能.ApSF对于RSMGs具有较好的细胞相容性.

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上海口腔医学

上海口腔医学

2012年21卷4期

370-377页

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