摘要目的:探讨C3H/He鼠头颈鳞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)转移淋巴结内CD8+T细胞的关键基因、通路和抑制性免疫检查点的表达.方法:应用头颈鳞癌SCC-7细胞系,构建免疫健全C3H/He小鼠胭窝淋巴结转移模型,利用免疫荧光染色技术确定淋巴结转移状态.利用流式细胞术分别分选出正常和转移淋巴结内的CD8+T细胞,进行转录组测序分析,筛选出差异表达基因,并进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析.采用流式细胞术和多重免疫荧光组织化学技术,检测荷瘤小鼠转移淋巴结内CD8+T细胞的4个免疫检查点的表达水平.采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学分析.结果:足垫注射SCC-7细胞4周后,C3H/He小鼠出现明显的腘窝引流淋巴结转移.对正常淋巴结和转移淋巴结内的CD8+T细胞进行转录组测序分析,筛选出差异表达基因912个,包括3个表达上调的抑制性免疫检查点相关基因Pdcdl、Lag3和Tigit.KEGG网络分析筛选出8个上调的肿瘤相关信号通路,包括Toll样受体信号通路、NF Kappa-B信号通路、TNF信号通路、MAPK信号通路、IL-17信号通路、NOD样受体信号通路、肿瘤中PD-L1和PD-1免疫检查点通路和p53信号通路.流式细胞术显示,小鼠转移淋巴结内CD8+T细胞出现PD-1和TIM-3蛋白高表达,多重免疫荧光进一步在头颈鳞癌患者的肿瘤转移淋巴结中确认CD8+T细胞高表达PD-1.结论:小鼠肿瘤转移淋巴结内CD8+T细胞的肿瘤相关信号通路显著激活,小鼠和头颈鳞癌患者转移淋巴结内CD8+T的PD-1表达水平显著增高,靶向CD8+T细胞的免疫治疗有可能成为头颈鳞癌淋巴结转移防治的新策略.