基于基因表达谱分析成肌细胞应力敏感基因及其潜在功能
Gene expression profiling analysis of stress-sensitive genes and their potential functions in myoblasts
摘要目的:筛选成肌细胞内应力敏感基因,揭示功能矫形力诱导面颌部肌肉改建的潜在靶基因及其调控机制.方法:采用基因芯片技术分析成肌细胞内的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs).通过基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路对 DEGs进行富集分析.采用实时荧光定量PCR验证DEGs.采用蛋白免疫印迹、透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)和激光扫描共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)检测应力对成肌细胞自噬的影响.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:筛选成肌细胞内DEGs 1410个,其中,上调788个,下调622个.GO分析显示,DEGs主要富集于信号转导、生物聚合物代谢和蛋白质代谢等过程.KEGG结果显示,DEGs主要富集于细胞外基质受体相互作用通路、癌症通路、MAPK信号通路、黏着斑激酶和溶酶体等信号通路.TEM和CLSM均观察到应力促进自噬小体的形成.蛋白免疫印迹显示,应力可促进自噬相关分子Beclin-1和LC-3Ⅱ的表达.以上过程均可被雷帕霉素促进或被3-MA抑制.结论:自噬可能在周期性张应力诱导成肌细胞命运调控过程中起重要作用.
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