掺锂化合物诱导乳牙牙髓干细胞成牙本质分化的实验研究
Experimental study of odontoblast differentiation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth induced by lithium-doped compounds
摘要目的:以添加氯化锂(LiCl)的矿化液模拟成牙本质分化环境,探讨其诱导乳牙牙髓干细胞(stem cells from hu-man exfoliated deciduous teeth,SHEDs)成牙本质分化的潜能.方法:提取原代SHEDs进行培养和鉴定,取P3~6 SHEDs进行后续实验.配制含0、1.0、2.5、5.0、10 mmol/L LiCl的成骨培养基(osteogenic medium,OM)用于诱导SHEDs成牙本质分化,1、3、5、7天时以CCK-8法检测细胞增殖能力.4、7、10天时以碱性磷酸酶染色检测细胞ALP活性.10天时,以RT-PCR检测DSPP、COL-1、Runx2基因水平,Western免疫印记法检测DSPP、Runx2蛋白水平.14天时,以茜素红染色和钙化结节半定量检测细胞矿化能力,筛选出最佳LiCl浓度.结果:CCK-8结果显示,低浓度(1.0、2.5 mmol/L)LiCl基本不影响细胞增殖,高浓度(5.0、10 mmol/L)LiCl抑制细胞增殖.4、7、10天时,低浓度LiCl提高SHEDs的ALP活性,其中,2.5 mmol/L LiCl组效果最佳,而高浓度LiCl则抑制ALP活性.RT-PCR及Western免疫印迹结果显示,低浓度LiCl促进SHEDs内DSPP、COL-1的基因表达及DSPP、Runx2蛋白表达.茜素红染色结果显示,1.0、2.5、5.0 mmol/L LiCl提高SHEDs矿化能力,10 mmol/L LiCl组与对照组形成的矿化结节量无显著差异.结论:低浓度锂化合物可促进SHEDs向成牙本质分化.
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