换一批抗人Lipocalin型前列腺素D合酶单链抗体基因的构建与表达
Construction and expression of the single chain Fv antibody against human Lipocalin-type prostaglandin D synthase
摘要利用RT-PCR技术,从稳定分泌抗人Lipocalin型前列腺素D合酶(Lipocalin-type prostaglandin D synthase,L-PGDS)单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞中获得抗体可变区基因;通过一柔性连接短肽[(Gly)4Ser]3,SOE PCR法将此重、轻链可变区拼接成完整的抗人L-PGDS单链抗体基因,并装入表达载体pET-28a(+),在BL21宿主菌中进行表达.经SDS-PAGE检测显示,在低剂量0.02 mmol/LIPTG诱导和较低温度25℃或28℃条件下培养,重组菌表达了一定量的可溶性单链抗体.后经Ni-NTA亲和层析柱纯化,得率为2 mg/100ml,纯度达92%;双夹心ELISA和免疫荧光竞争抑制实验证实,纯化后的单链抗体具有较好的亲和力和特异性.
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主题词
单链抗体(Single-Chain Antibodies)前列腺素(Prostaglandins)人(Persons)基因(Genes)受精卵输卵管内移植(Zygote Intrafallopian Transfer)
分类号
R392.11
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-2478.2005.03.002
发布时间
2005-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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