首页 > 现代免疫学 > 应用RNA干扰阻抑小鼠L929细胞MHC Ⅱ类基因表达及功能的研究

应用RNA干扰阻抑小鼠L929细胞MHC Ⅱ类基因表达及功能的研究

Study on the suppressive effect of RNA interference on the expression and functions of MHC class Ⅱ transactivator (CIITA) and MHC class Ⅱgenes of L929 cells

摘要为了探讨RNA干扰技术对小鼠CIITA(Ⅱ类反式激活因子)以及MHC Ⅱ类基因表达和功能的影响.我们首先设计并合成4条小干扰RNA(small-interfering RNA,siRNA)(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3和siRNA-4)序列,在阳离子脂质体的介导下转染小鼠L929细胞.48h后,用半定量RT-PCR和定量PCR方法检测CIITA mRNA的变化;流式细胞仪检测I-A<'h>分子表达的变化.接着构建了 CIITA特异的短发夹状干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,通过在靶细胞内转录形成具有特异干扰作用的shRNA,高效、特异的阻断CIITA基因的表达,形成Ⅱ类基因功能缺陷或使其表达降低.进一步混合淋巴细胞反应观察同种异基因CD4~+T细胞对稳定转入RAN干扰载体的L929细胞的免疫应答强度,结果证实该L929细胞对不同受者CD4~+T细胞的刺激能力分别下降73.90%和76.34%.以上结果为减低同种异体/异种器官细胞性排斥提供了新的思路和手段.