表达新城疫病毒血凝素神经氨酸酶(HN)基因重组鸭肠炎病毒的构建

Construction of Recombinant Duck Enteritis Virus with HN Gene of Newcastle Disease Virus

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摘要目的构建表达新城疫病毒血凝素神经氨酸酶(HN)基因的重组鸭肠炎病毒(DEV).方法利用同源重组技术,在DEV Clone-03基因组中胸苷激酶(TK)基因内部插入新城疫病毒HN基因.以本实验室已构建的rDEV TK-EGFP株为亲本病毒,将病毒基因组与转移载体共转染及蚀斑纯化,获得表达新城疫病毒HN基因的重组鸭肠炎病毒.结果重组病毒经基因水平和蛋白水平的鉴定,证明新城疫病毒HN基因正确插入DEV基因组内部且有效表达;复制动力学和遗传稳定性检测,证明重组病毒rDEV TK-HN滴度略有下降,但复制趋势与亲本病毒一致;在鸡胚成纤维细胞(CEF)和SPF鸡胚连续传代20代,表明HN基因随病毒传代而稳定遗传、表达.结论利用同源重组技术,对鸭肠炎病毒基因组进行修饰,构建了TK基因缺失表达新城疫病毒HN基因的重组鸭肠炎病毒,该病毒能够携带HN基因稳定遗传和表达.

作者梁殊林 ^[1] 李慧昕 ^[2] 陈洪岩 ^[3] 刘胜旺 ^[4] 学术成果认领

作者单位东北农业大学生命科学学院,哈尔滨,150030 ^[1] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽呼吸道病创新团队,哈尔滨,150001 ^[2] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心,哈尔滨,150001 ^[3] 东北农业大学生命科学学院,哈尔滨150030;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽呼吸道病创新团队,哈尔滨150001 ^[4]

关键词鸭肠炎病毒(DEV)新城疫病毒(NDV)血凝素神经氨酸酶(HN)基因重组病毒基因修饰 Duck enteritis virus (DEV)Newcastle disease virus (NDV)HN gene Recombinant virus Genetic modification

主题词基因(Genes)病毒(Viruses)新城疫病毒(Newcastle disease virus)鸭(Ducks)肠炎(Enteritis)

分类号 Q95-33

栏目名称论著

DOI 10.3969/j.issn.1674-5817.2015.03.004

发布时间 2015-08-03