登革病毒对树鼩不同组织来源细胞的易感性及感染特性研究
Study on Susceptibility and Infection Characteristics of Dengue Virus in Cells Sourced from Different Tissues of Tree Shrews
摘要目的 探究登革病毒(denguevirus,DENV)对树鼩不同组织来源细胞的易感性及感染特征,为扩充DENV的树鼩易感细胞库提供依据.方法 将DENV以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.02的剂量分别接种于树鼩皮肤成纤维细胞(tree shrew skin fibroblasts,TSFs)、原代树鼩肾上皮细胞(primary tree shrew renal epithelial cells,pTRECs)、树鼩主动脉内皮细胞(tree shrew aortic endothelial cells,TAECs)、树鼩主动脉平滑肌细胞(tree shrew aortic smooth muscle cells,TASMCs)、树鼩肝细胞(tree shrew hepatocytes,THs)、树鼩角膜基质细胞(tree shrew corneal stromal cells,TCSCs)、树鼩脑微血管内皮细胞(tree shrew brain microvascular endothelial cells,TBMECs)及树鼩视网膜微血管内皮细胞(tree shrew retinal microvascular endothelial cells,TRMECs),用常规培养DENV的C6/36、Vero、A549及BHK-21细胞系作为阳性对照.在感染病毒后6d内,每12 h用倒置显微镜观察各种细胞的病变效应,用实时荧光定量PCR检测细胞培养物中病毒核酸载量,绘制病毒增殖曲线,用噬斑实验检测病毒滴度.结果 除TRMECs外,DENV对7种树鼩细胞均易感.随着感染时间的延长,7种树鼩细胞均出现变圆、脱落、坏死及裂解等明显的病变效应.在pTRECs、TBMECs、TASMCs、TAECs和THs这5种树鼩细胞的培养裂解物中检测到的病毒核酸载量与4种阳性对照细胞接近,大于4× 107拷贝/μL.以上5种树鼩细胞均能产生感染性子代病毒,其中3种树鼩细胞TAECs(3.13×105PFU/mL)、THs(2.03×105PFU/mL)、pTRECs(1.58×105 PFU/mL)中的 DENV 滴度较接近阳性对照细胞 C6/36(3.85×105 PFU/mL),且能更早收获病毒.结论 DENV对树鼩多种组织来源的细胞易感,且病毒增殖速度快于常见其他物种来源的传代细胞系,其中TAECs、THs和pTRECs尤其适于DENV增殖培养.同时,这些细胞可能参与DENV在树鼩体内的感染.
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