摘要目的 构建痘苗病毒天坛株(vaccinia virus Tiantan strain,VTT)感染AG6小鼠脑病动物模型.方法 通过以0.01的感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染Vero细胞,扩增VTT并进行浓缩和滴定,孵育72 h后,收集含病毒的细胞进行浓缩;将浓缩的病毒悬浮液连续稀释(10倍梯度)并加入到含有形成致密单层Vero细胞的6孔板中进行噬斑实验,计数每孔形成的空斑数目,并根据样品的稀释倍数计算病毒滴度.将14只5～6周龄的AG6小鼠(雌雄各半,并按性别分笼饲养)随机分为对照组(n=3,PBS)、低接种量组(n=6,1×105 PFU)和高接种量组(n=5,5×105 PFU).将小鼠经异氟烷吸入麻醉后,进行滴鼻感染.每日观察各组小鼠精神状态,记录其体重及死亡情况,并在感染后第13天经尾静脉注射2%伊文思蓝(Evans Blue)(4 mL/kg体重)以评估各组小鼠血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的破损情况,然后收集小鼠脑组织样本进行星形胶质细胞和小胶质细胞活化的免疫荧光分析.结果 纯化后的VTT滴度为1×107 PFU/mL.与对照组相比,低接种量组小鼠的体重无明显变化,且未出现死亡;高接种量组小鼠在感染后第5天开始体重显著减轻(P＜0.05),并伴有致死结果.感染后第13天,低接种量组小鼠的脑组织中未检测到伊文思蓝外渗,高接种量组小鼠的嗅球区域显示出明显的蓝色染色,提示BBB破裂.免疫荧光分析显示,感染后第13天,低接种量组小鼠嗅球区域星形胶质细胞和小胶质细胞没有明显增殖,高接种量组小鼠中可观察到明显的胶质细胞活化.结论 成功建立VTT感染AG6小鼠的脑病动物模型,其特征是小鼠BBB损伤和特异性定位于嗅球区域的反应性胶质增生(表现为星形胶质细胞和小胶质细胞增生).