摘要目的 探究肾上腺素受体α2A(adrenoceptor alpha 2A,Adra2a)调节脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein,LBP)敲除小鼠(Lbp-/-)原代肝细胞炎症的机制.方法 通过两步灌流法提取C57BL/6J小鼠和Lbp-/-小鼠(来自C57BL/6J小鼠)原代肝细胞,构建经LPS诱导的原代肝细胞体外炎症模型,同时通过腹腔注射LPS以构建炎症小鼠体内模型.将体外实验分为5组,即Control组、LPS组、BRL+LPS组、OE-NC+LPS组和OE-Adra2a+LPS组.其中,Control组为空白对照;LPS组加入LPS刺激原代肝细胞;BRL+LPS组加入BRL-44408 maleate预处理原代肝细胞后,再加入LPS;OE-NC+LPS组为加入空载病毒转染原代肝细胞后,再加入LPS;OE-Adra2a+LPS组为加入Adra2a过表达慢病毒转染原代肝细胞后,再加入LPS.同样,将体内实验分为5组,即Control'组、LPS'组、BRL+LPS'组、OE-NC+LPS'组、OE-Adra2a+LPS'组.其中,Control'组为空白对照;LPS'组为经腹腔注射LPS;BRL+LPS'组为经腹腔注射BRL-44408 maleate预处理小鼠后,再注射LPS;OE-NC+LPS'组为经腹腔注射空载病毒预处理小鼠后,再注射LPS;OE-Adra2a+LPS'组为经腹腔注射Adra2a过表达慢病毒预处理小鼠后,再注射LPS.通过CCK-8法检测经抑制和过表达Adra2a后的小鼠原代肝细胞存活率,采用实时荧光定量PCR法检测抑制和过表达Adra2a后肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6和IL-1β这3种炎症因子基因表达量的变化,采用蛋白质印迹法检测经LPS刺激后 Adra2a蛋白表达量以及细胞外调节蛋白激酶 1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)蛋白磷酸化的变化情况.结果 体外实验中,在LPS刺激下,与Control组相比,C57BL/6J小鼠原代肝细胞中Adra2a蛋白表达量显著下降(P＜0.05),而Lbp-/-小鼠原代肝细胞中Adra2a蛋白表达量却显著升高(P＜0.001);与LPS组相比,BRL+LPS组细胞的存活率显著升高(P＜0.01),TNF-α、IL-6和 IL-1β基因转录水平显著降低(P＜0.01,P＜0.001,P＜0.001),ERK1/2、p38和JNK蛋白的磷酸化水平均显著降低(P＜0.01,P＜0.001,P＜0.001);与 OE-NC+LPS 组相比,OE-Adra2a+LPS 组细胞存活率显著下降(P＜0.001),TNF-α、IL-6和IL-1β基因转录水平显著升高(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.001),ERK1/2、p38和JNK蛋白的磷酸化水平均显著升高(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.001).体内实验中,与LPS'组相比,BRL+LPS'组小鼠肝脏组织中ERK1/2、p38和JNK蛋白的磷酸化水平均显著降低(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.01);与OE-NC+LPS'组相比,OE-Adra2a+LPS'组小鼠肝脏ERK1/2、p38和JNK蛋白的磷酸化水平均显著升高(P＜0.01,P＜0.001,P＜0.01).结论 LPS可引起Lbp-/-小鼠原代肝细胞Adra2a中蛋白表达量显著升高;Adra2a蛋白可以通过MAPK信号通路调节经LPS诱导的Lbp-/-小鼠原代肝细胞炎症水平.