换一批
换一批摘要目的 研究LOX-1受体在早期动脉粥样硬化中的作用,建立体外LOX-1高表达细胞模型,用于探讨LOX-1与Ox-LDL的相互作用及参与泡沫细胞形成的机制.方法 根据人类cDNA文库设计引物,采用巢式PCR技术用人单核细胞转化的巨噬细胞中扩增出LOX-1完整编码区,克隆至pEGFP-C1重组真核表达载体,经测序证实后,用脂质体转染法转染至293T细胞,采用RT-PCR鉴定外源基因的表达,倒置荧光显微镜检测质粒转染效率和融合蛋白的细胞膜上定位情况,流式细胞技术检测EGFP-LOX-1融合蛋白表达情况以及其对Ox-LDL的结合能力.结果 pEGFP-LOX-1重建质粒经测序证实克隆的LOX-1序列完整,插入方向正确,转染后实验组LOX-1 mRNA大量表达,融合蛋白正确定位在细胞膜表面,并显示结合配体Dil-Ox-LDL的功能提高到6.3倍.表明所克隆的LOX-1受体具有特异性结合Ox-LDL的功能,从而建立了高表达LOX-1受体的细胞.结论 成功克隆人类LOX-1基因,使其在293T细胞中高度表达并获得了相应的功能,为进一步研究LOX-1提供有利工具.
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