换一批
换一批摘要目的 在体外重组表达、纯化CtBP1发生SUMO化修饰时参与反应的各个蛋白:CtBP1(底物)、SUMO1(SUMO蛋白)、Ubc9(E2结合酶)和PC2(E3连接酶),体外组装CtBP1 SUMO化修饰复合体CtBP1-SUMO 1-Ubc9-PC2,通过结构解析捕捉CtBP1发生SUMO化修饰的中间状态,阐明CtBP1 SUMO化修饰的分子机制.方法 通过pRSFDuet-1载体构建人源CtBP1、SUMO1、Ubc9、PC2表达质粒,系统表达纯化各蛋白组分,并通过分子筛检测并优化各个蛋白的状态,以及CtBP1-SUMO1-Ubc9-PC2复合体的形成,通过单颗粒冷冻电镜解析复合体结构.结果 通过原核表达系统成功表达并纯化获得了参与CtBP1 SUMO化反应复合体中的各个蛋白CtBP1、SUMO1、Ubc9与PC2,获得了 CtBP1 SUMO化修饰复合体,通过负染和冷冻电镜的样品优化初步获得了 CtBP1 SUMO化修饰复合体的冷冻电镜结构.结论 成功获得了 CtBP1 SUMO化反应中间状态CtBP1-SUMO1-Ubc9-PC2复合体蛋白以及初步的冷冻电镜结构,为阐明CtBP1发生SUMO化修饰的分子机制奠定了重要基础.
更多相关知识
- 浏览6
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
