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基于片段互补策略的Split-TurboID体系构建及其在细胞间通信研究中的应用

Construction of Split-TurboID system based on fragment complementation strategy and its application in the exploration of intercellular communication

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摘要目的基于片段互补策略构建Split-TurboID技术体系,实现对细胞间相互作用蛋白的高效、特异性标记.方法构建基于分泌型和可介导细胞间直接互作的N-TurboID和C-TurboID非活性片段,并验证其在细胞中的表达和定位.通过Western印迹法、免疫荧光法和流式细胞术评估Split-TurboID技术的标记能力.结果成功构建并验证了自发诱导与诱饵蛋白互作诱导的Split-TurboID技术体系.Western印迹法、免疫荧光法和流式细胞术结果表明,N-TurboID和C-TurboID片段在靠近时彼此具有高亲和力,可重新组成具有活性的TurboID酶,再通过生物素标记后,可实现探究分泌型蛋白质互作和细胞间直接相互作用.结论 Split-TurboID技术为细胞间相互作用的研究提供了高效、灵活且特异性强的生物素标记方法,为探索细胞间通信提供了有力的技术支持.

作者耿丹丹 ^[1] 张心如 ^[2] 韩毅 ^[3] 赵章婷 ^[2] 安利伟 ^[4] 学术成果认领

作者单位安徽理工大学医学院,安徽淮南 232001 ^[1] 同济大学癌症中心,上海 200331;同济大学附属第十人民医院口腔科,上海 200072 ^[2] 同济大学附属第十人民医院口腔科,上海 200072 ^[3] 安徽理工大学医学院,安徽淮南 232001;同济大学癌症中心,上海 200331;同济大学附属第十人民医院口腔科,上海 200072 ^[4]

关键词片段互补策略 Split-TurboID 邻近标记技术蛋白质相互作用细胞间通信 fragment complementation strategy Split-TurboID proximity labeling technology protein interaction intercellular communication

分类号 R34（人体生物化学、分子生物学）

栏目名称

基础研究

DOI 10.12289/j.issn.2097-4345.24492

发布时间 2025-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

上海市自然科学基金原创探索项目（23ZR1480400）上海市启明星项目（23YF1432900）同济大学自主原创基础研究项目（22120240327）