换一批蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10及其突变体的外源表达和活性测定
Exogenous expression and activity determination of AmPR-10 and its mutants
摘要目的:蒙古黄芪病程相关蛋白(Astragalus membranaceus pathogenesis-related protein-10,AmPR-10)具有核酸酶活性,对黄芪生长发育的抗病过程有重要作用.为进一步提高野生型AmPR-10的活性,设计了相应突变体,并分析其表达量和活性较野生型的变化.方法:通过理性分析发现野生型AmPR-10的Ser(84)、Gly(140)、Glu(141)突变后会影响目标蛋白的空间结构、降低底物单核苷酸的对接自由能,据此设计合成了两个突变体M1:S84D+G140V、M2:S84D+G140V+E141M,并对野生型AmPR-10与M1、M2分别进行外源低温诱导表达,同时测定了他们的核酸酶活性和抗菌抑菌作用.结果:突变体M1、M2经诱导后表达量和核酸酶活性皆高于野生型,其中M1、M2核酸酶活性分别为野生型的1.46倍及1.45倍;突变体M1可对金黄色葡萄球菌产生抑菌作用,抑菌环大小约为5 mm.结论:AmPR-10突变体的活性较野生型有所提高,这一结果有利于深入探讨AmPR-10的相关活性机制,为抗病黄芪的育种奠定理论依据.
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分类号
R285
栏目名称
DOI
10.19763/j.cnki.2096-7403.2022.02.08
发布时间
2022-06-22
基金项目
山西省自然科学基金面上项目（201901D111339）；
山西省高等学校科技创新项目（2020L0407）；
山西省高等学校科技创新项目（2020L0420）；
山西中医药大学科技创新能力培育计划（2020PY-JC-06）；
山西中医药大学科技创新能力培育计划（2021PY-JC-06）
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