换一批人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定
Cloning, Expression, Purification and Characterization of Recombinant Human Ciliary Neurotrophic Factor Genes
摘要目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性.方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中.将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达.细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTE重组蛋白.然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性.结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Westem印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性.表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白.该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活.结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白.
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主题词
人(Persons)蛋白(Egg White)睫状神经营养因子(Ciliary Neurotrophic Factor)鸡胚(Chick Embryo)神经节, 脊(Ganglia, Spinal)
分类号
Q789
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-8467.2005.04.010
发布时间
2005-09-01
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