换一批摘要目的 构建人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2(human indoleamine 2,3-dioxygenase-2,hIDO2)原核表达载体,表达、纯化获得hIDO2蛋白.方法 采用基因工程手段获得hIDO2原核表达载体并转化表达菌株,筛选合适的重组质粒及异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度进行蛋白表达;通过亲和层析纯化重组hIDO2,BCA法测定蛋白浓度并计算蛋白收率;SDS-PAGE电泳检测hIDO2表达情况,通过软件分析得到蛋白纯度;Western blot检测目的蛋白特异性.结果 重组质粒经电泳分析、双酶切、D.NA测序鉴定表明构建成功;经筛选发现重组质粒pET28a-hIDO2比pGEX-4T-1-hIDO2的hIDO2表达效果好;SDS-PAGE电泳及Western blot均验证了在相对分子质量45 000处的特异性目的条带的存在;经测定及计算得出蛋白纯度为97.1％,蛋白浓度为20 mg/mL,蛋白收率为15 mg/L.结论 成功构建重组质粒用于表达及纯化hIDO2,蛋白浓度、纯度、收率及特异性均较高.
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DOI
10.3969/j.issn.1672-8467.2016.04.004
发布时间
2016-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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